血球计数板的有关解读

science17

        血细胞计数板又称血球计数器，是高中生物学实验中重要的细胞计数工具。本文对血细胞计数板的结构、计数原理等问题进行详细的解读。1 解读血细胞计数板的相关信息1． 1 目视信息及分析         血细胞计数板是一块特制的厚型载玻片，有4 个凹槽，中间部分被一“H”型凹槽分成上、下两个相同的计数平台，每个平台中有长、宽各3 mm的计数区域，平均分为 9 个大方格。计数室(指中央的一个大方格，下同)的长和宽各是 1 mm，计数板上标识的“0.1 mm”是指计数室的高度(图 1)。所以，计数室体积为1 mm × 1 mm × 0.1 mm = 0.1 mm 3 = 10-4 mL。        血细胞计数板有两种规格，一种是 25 × 16 型(汤麦式，标识为 XB-K-25)，另一种是 16 × 25 (希利格式)。汤麦式血细胞计数板的每个计数室有 25 个中方格，每个中方格又分为 16 个小方格;而希利格式血细胞计数板每个计数室中有 16 个中方格，每个中方格又分 25 个小方格。        所以，上述两种规格的血细胞计数板的计数室都有400 个小方格，即体积为0. 1mm 3 的计数室被平分为400 个小格。1．2 显微观察信息及分析         在显微镜下，可以观察到计数室及其周围被许多线条规则地分隔成许多小室(图 2)。计数板上的线条分为单线和双线两种，双线区分不同中方格，每一中方格四周的线都是双线，计数室与周围区域的区分线也是双线；单线用于区分小方格 。计数室内的单线和双线向外延伸，因此计数室外的线也可分为单线和双线两种。计数室周围的线并非只是起引导作用，与计数室四个顶点相邻的四个大方格，其内只有中方格而无小方格，这四个区域可用于体积较大的单细胞计数(如白细胞等)。2 细胞计数原理        由于计数室内有 400 个小方格，如果对所有小方格进行细胞计数，因视野所限，不易操作，容易造成较大误差，所以一般采用定点取样计数。不同规格的血细胞计数板取样点不同，汤麦式血细胞计数板计数室中有 25 个中方格，则取计数室 4 个角和中央的共 5 个中方格进行观察计数;而希利格式血细胞计数板的计数室中有 16 个中方格，则取计数室 4 个角的中方格进行观察计数。对于压在方格界限上的细胞应当计数相邻两边及其夹角上的细胞数，再加上中方格内的细胞数，作为该中方格的细胞总数。如果一个方格内细胞数过多，难以数清，应当再对样液进行适当稀释，一般以每个小方格内分布 4 ～ 5 个细胞为宜。如果统计的每个中方格内的细胞数目相互之间相差 20 个以上，表示细胞分布不均，必须对样液摇匀后重新计数。3 计算细胞密度的方法        对 5(或4)个中方格计数完毕后，可通过下列两种方法计算样液中细胞密度: ① 细胞个数 /mL = 5(或4) 个中方格中细胞总数 ÷ 5(或4) × 25(或16) × 稀释倍数 × 10 4 ; ② 细胞个数 /mL = (80 个小格中细胞数) ÷80 × 400 × 稀释倍数 × 10 4 。其中“× 10 4 ”表示将0.1 mm 3 (计数室体积) 转换成 1 mL 溶液中细胞密度。4 细胞计数注意事项及思考        如果计数室中细胞充分分散(图 3a)，则逐个计数;如果出现细胞成簇分布，能够清晰分辨细胞核和细胞质的分别计数为单个细胞(图 3b);如果不能清晰分辨细胞核，则计为 1 个细胞(图 3c)。如果在实验中多处出现图 3c 的现象，最可能的原因为样液未充分摇匀或稀释倍数不够所致，需重新实验;如果只是一处或几处出现此现象，可按以上计数方法进行计数。在细胞计数中，为较快而准确的计数，一般选择“S”型计数路径进行计数: 第一排，从左向右;第二排，从右向左;第三排，从左向右;第四排，从右向左(图4) 。在 2018 年江苏省生物学科学业水平测试卷中，第 40 题第(2)小题即考查了对一个视野中酵母细胞最佳计数路径的选择。虽然此问题在教材中并未直接涉及，但却是学生实验操作中不可回避的问题，该试题通过对学生科学思维的考查，充分体现了生物学学科核心素养的要求，也再次提醒教学中要用教材教，而非教教材。

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北落中原

确实想看看血球计数板的详细解读，
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science17

北落中原 发表于 2019-9-5 09:52
确实想看看血球计数板的详细解读，
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