单抗制备从免疫后小鼠提取的B细胞是浆细胞吗？

秦四哥

                              

要回答这个问题，需要先了解哺乳动物B细胞的种类，其分化过程可分为前B细胞、不成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞五个阶段。

显然，按照这个定义，B细胞应该包括浆细胞。

那么，到底是应该用成熟B细胞还是用浆细胞进行融合呢?答案是两者都不可以。

当细胞同时表达IgM和IgD时，称为成熟的B细胞，此时可以接受抗原的刺激。成熟的B细胞迁移到脾脏，若未遇抗原刺激，数天后相当数量的B细胞死亡；只有那些获得抗原刺激和获得TH细胞提供刺激信号的B细胞，一部分分化为记忆细胞，大部分分化为分泌抗体的浆细胞。由于成熟B细胞未接受抗原刺激，不能产生抗体，但是浆细胞也不适用于细胞融合，浆细胞失去了对抗原的识别能力。有研究证实，小鼠注射抗原后7～8d产生抗体达到高峰，也就是7～8d后浆细胞产生达到高峰，但是取此时的细胞和骨髓瘤细胞融合效率很低。若取免疫后3d的细胞，则融合的效率最高。而此时B细胞正处于从成熟B细胞向浆细胞分化的时期，也就是活化B细胞时期。所以，严格来说，用于细胞融合的是接受过抗原刺激的活化B细胞。

理论上讲，抗原直接使用经过免疫的小鼠脾脏的单细胞悬液，而不需要再从脾脏中分离B细胞。因为融合后的细胞悬液中除了杂交瘤能在筛选培养基上生长，其他融合形式的细胞以及未融合的细胞均不能生长而被淘汰。但实际操作过程中，由于脾内存在的红细胞可能会对融合造成不利影响，同时脾细胞中所含对抗原具有特异性的B细胞比例相对较少，且PEG诱导的细胞融合又是一个相对低效的偶然过程，研究者在融合前会先富集对抗原具有特异性的B细胞，然后再进行细胞融合。

附带说一句，由于骨髓瘤细胞也会分泌一些免疫球蛋白，一般用于融合的骨髓瘤细胞通常都是经筛选出来的缺失抗体分泌能力的细胞株。

启示：这个问题比较典型的体现了理论分析与实际操作之间的差距。教学中老师完全没有必要给学生讲清楚问题的缘由，因为这些不是教学要求的内容，但作为老师自己心里应该清楚，避免给学生一个错误的或者僵化的结论。毕竟，这一问题的答案还与改进淋巴细胞杂交瘤方法有密切关系。谨记：生物学的发展很多时候是在发现事实和发展概念。

——汉水丑生生物同行群掌上的沙老师热心解答